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本试剂盒是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，适用菌株广泛，能用于多个质粒的共同转化。每个试剂盒可做200次质粒的转化。

• 第一次使用Carrier DNA，需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20℃保存。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。
  
• PEG溶液低温情况下会析出，使用前最好常温温育确保完全溶解才使用。
  
• 酵母转化整个过程请无菌操作。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线，30℃培养2～4天以活化菌种。
  
• 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3～5mm短线，30℃培养2～4天。待酵母单菌落生长至2mm时，接种。
  
• 挑取酵母单菌落接种到3mL YPDA液体培养基，30℃培养过。
  
• 第二天转接到含50mL YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.5～0.8范围。4000rpm离心5min收集细胞，去上清。
  
• 用30mL无菌去离子水重悬沉淀细胞。4000rpm离心5min，去上清。
  
• 沉淀用1.5mL的100mM LiAc重悬，之后转移到1.5mL离心管内。4000rpm离心5min，去上清。
  
  • 100mM LiAc：150μL 1M LiAc+1350μL无菌水混匀即可。
• 用1.0mL冻存液重悬沉淀，此时，即得到所需的酵母感受态细胞。按50μL（或100μL）分装到1.5～2mL无菌冻存管内，或直接转化，或进行冻存。
  
  • 如果进行文库转化，按600μL/管分装。
• 按照缓慢冷冻的方法（二选一）：
  ① 将感受态放入程序降温盒内，再放到-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存；
  ② 将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。
  
  • 缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。

• 按照以下体系制备转化用混合液，每个转化反应需310μL的混合液。
  

  成分	质粒转化混合液
  1M醋酸锂溶液	36μL
  50% PEG溶液	240μL
  Carrier DNA(10mg/mL)	10μL
  质粒(~200ng/μL)	5μL（根据质粒的浓度加入相应的体积）
  无菌去离子水	至310μL

• 取310μL转化混合液加入上述制备好的1管感受态细胞（50～100μL/管），用枪轻轻反复吹吸菌体，使得管底的酵母细胞充分悬浮。
  
• 置于30℃水浴锅孵育30min，每10min轻轻混匀一次。
  
• 置于42℃水浴锅热激30min，每10min轻轻混匀一次。
  
• 12000rpm离心15s，去掉上清液。
  
• 可选步骤：用1mL YPD plus重新悬浮沉淀，30℃摇床震荡培养30～60min。12000rpm离心15s，去掉上清液。
  
  • 转化产物使用YPD Plus复苏，转化效率可提高50～100%。若想提高现有酵母的转化效率，推荐进行此步操作。
• 往沉淀内加入100μL无菌去离子水，重新悬浮沉淀。并转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养2～4天。